上海申安医疗器械厂发现甘薯可作为蔬菜或粮食全年种植,尤其以秋冬种植面积最大。甘薯各品种主要依靠无性繁殖,在长期的栽培过程中常因病毒的感染而退化,导致产量和品质严重受损。已经成为制约甘薯产业发展的重要因素。利用组织培养技术,快速地生产优质无病毒的种苗是甘薯产业健康可以持续发展的重要保障。此外,上海申安医疗器材厂还发现大量研究表明,由于次生代谢产物氧化而引起的褐变,以及微生物造成的污染是甘薯的组织培养的两大难题。甘薯组培苗生产过程中,轻度褐变会影响甘薯初接种外植体生根发芽效率,严重褐变会直接导致外植体死亡。因此,上海申安医疗器材厂针对特定地区的环境条件和品种,以及组织培养过程中的外植体褐化及微生物污染等关键问题,建立一套相对完善的甘薯再生体系是生产脱毒苗的重要环节。
主要仪器
超净台(苏州苏洁净化设备有限公司 SW-CJ-2D),接种器械灭菌器(上海农卉生物科技有限公司 NH-JZ-330),压力灭菌锅(上海申安医疗器材厂),分析天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司 2-16P)。
上海申安LDZF-50L-II立式高压蒸汽灭菌器
外植体部位、消毒方案、培养基配方以及防褐化剂的选择是热带地区甘薯主栽品种的再生体系构建的关健技术环节。上海申安本研究表明,不同部位外植体存活率比较中,宜优先选择侧芽和顶芽,最后为茎段。芽作为生长点含有大量生长素等激素类物质,出芽率会明显高于茎段。类似的结果在菊花组织培养中也有体现,带芽茎段作外植体优于其它部位。本研究中,甘薯芽的成苗率明显高于茎段,且侧芽要优于顶芽,推测是顶芽的生长素过高,抑制生长导致。
本研究中,甘薯茎段作外植体时存活率波动较大,可能是不同品种甘薯茎段中所含微生物种类不同,导致消毒效、污染率的不同,最终导致了存活率的较大波动。消毒方式的影响实验中,上海申安在本研究发现成苗率与消毒剂的浓度及处理时间密切相关,高浓度消毒剂污染程度虽低,但成苗率也不高,过高的消毒剂浓度和过长的消毒时间可损伤植物材料,导致随后的组培过程中的玻璃化或褐化死亡的情况,宜选用较低浓度的氯化汞与次氯酸钠联合进行消毒。