1 仪器
精密电子天平（型号：PB203-N，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；4℃冰箱（BCD-205E/Y，海尔集团）；苏泊尔微电磁炉 （型号：C19A01-A，浙江苏泊尔股份有限公司）；智能生化培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）；振荡培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）；立式压力蒸汽灭菌器（型号：LDZX-50KBS
，上海申安医疗器械厂）；电热恒温鼓风干燥箱（DHG-9240A，上海精宏实验设备有限公司）；无菌操作台（型号：JB-VS-840U，苏州佳宝净化工程设备有限公司）；精密试纸（pH 6.4-8.0，上海三爱思试剂有限公司）；可调微量锁紧移液器（型号：WKYⅣ-5，上海佳音分析仪器厂）；烧杯（50mL、100mL、500mL、1000mL 和2000mL）；量筒（50mL、100mL、250mL 和 1000mL）；锥形瓶（100mL、250mL 和 500mL）；分液漏斗（250mL）；10mL 移液管；纱布；微量移液器和枪头（20μL，200μL 和 1000μL）；接种环；酒精灯；脱脂酒精棉；培养皿；玻璃棒。
2 实验方法
2.1 未知菌株的发现
无菌条件下，培养本实验室保存的放线菌 A45，从中挑取未知菌种进行分离纯化培养，挑取纯化的单个菌落，点在密集划线的正常放线菌 A45 平板上，放培养箱 28℃倒置培养 48h 观察。
2.2 未知菌株的发酵培养
无菌条件下，挑取未知菌株单个菌落接种于高氏一号培养液，置于振荡培养箱内以 200r/min 28℃振荡培养 4d。待大部分孢子成熟后，即可用于发酵培养。按照 8%（20mL）的接菌量接种于新的高氏一号培养液中，置于振荡培养箱内以 200r/min 28℃振荡培养 4d。
2.3 抑菌活性物质的萃取浓缩
将澄清的发酵液用有机溶剂进行萃取。加入 1/4 体积的有机溶剂，充分搅拌后静置 4h，收集有机相和水相，用滤纸片法检测各相萃取液的抑菌活性，将有活性相萃取三次后分别合并。将合并相于 70℃下旋转蒸发浓缩，4℃保存备用。
2.4 活性物质的抑菌实验
2.4.1 滤纸片法
无菌条件下，用无菌镊子夹取直径为 5mm 的圆形无菌滤纸片分别放入需检测的溶液中，充分浸泡，2h 后取出无菌风干，备用。将活化好的供试菌株密集划线接种于无菌平板上，用镊子夹取风干的滤纸片放在接种的平板上。放入培养箱。37℃倒置培养 24h，观察结果。
2.4.2 微量肉汤稀释法
无菌操作，将制备的浓度相当于 0.5 麦氏比浊标准的菌悬液，经肉汤 1∶1000 稀释后分别加到无菌 96 孔聚苯乙烯板中的第 1-11 孔，每孔中加 180μl。将不同浓度梯度的粗提物溶液分别加到上述 1-10 孔中，每孔 20μl，第11 孔不加粗提物作为生长对照。使第 1-11 孔最终粗 提 物 浓 度 分 别 为 128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0mg/ml，将 96 孔板密封后置 35℃普通空气孵育箱中，孵育 24h，用酶标仪在 630nm 处检查吸光度值，记录实验数据。
