由于该菌可生长在放线菌 A45 平板中，暂认为该菌与放线菌 A45 需相同的生活环境。对于在实验中发现的新菌种，如能及时采取对其的纯化培养和确认，可能会对以后的实验及研发带来有利影响。但该实验现停留在实验室基础研究层面，还需进一步进行 PCR 测序实验，确定该菌真实身份。
1 仪器
精密电子天平（型号：PB203-N，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；4℃冰箱（BCD-205E/Y，海尔集团）；苏泊尔微电磁炉 （型号：C19A01-A，浙江苏泊尔股份有限公司）；智能生化培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）；振荡培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）；立式压力蒸汽灭菌器（型号：LDZX-50KBS
，上海申安医疗器械厂）；电热恒温鼓风干燥箱（DHG-9240A，上海精宏实验设备有限公司）；无菌操作台（型号：JB-VS-840U，苏州佳宝净化工程设备有限公司）；精密试纸（pH 6.4-8.0，上海三爱思试剂有限公司）；可调微量锁紧移液器（型号：WKYⅣ-5，上海佳音分析仪器厂）；烧杯（50mL、100mL、500mL、1000mL 和2000mL）；量筒（50mL、100mL、250mL 和 1000mL）；锥形瓶（100mL、250mL 和 500mL）；分液漏斗（250mL）；10mL 移液管；纱布；微量移液器和枪头（20μL，200μL 和 1000μL）；接种环；酒精灯；脱脂酒精棉；培养皿；玻璃棒。
2 实验方法
2.1 未知菌株的发现
无菌条件下，培养本实验室保存的放线菌 A45，从中挑取未知菌种进行分离纯化培养，挑取纯化的单个菌落，点在密集划线的正常放线菌 A45 平板上，放培养箱 28℃倒置培养 48h 观察。
2.2 未知菌株的发酵培养
无菌条件下，挑取未知菌株单个菌落接种于高氏一号培养液，置于振荡培养箱内以 200r/min 28℃振荡培养 4d。待大部分孢子成熟后，即可用于发酵培养。按照 8%（20mL）的接菌量接种于新的高氏一号培养液中，置于振荡培养箱内以 200r/min 28℃振荡培养 4d。
2.3 抑菌活性物质的萃取浓缩
将澄清的发酵液用有机溶剂进行萃取。加入 1/4 体积的有机溶剂，充分搅拌后静置 4h，收集有机相和水相，用滤纸片法检测各相萃取液的抑菌活性，将有活性相萃取三次后分别合并。将合并相于 70℃下旋转蒸发浓缩，4℃保存备用。
2.4 活性物质的抑菌实验
2.4.1 滤纸片法
无菌条件下，用无菌镊子夹取直径为 5mm 的圆形无菌滤纸片分别放入需检测的溶液中，充分浸泡，2h 后取出无菌风干，备用。将活化好的供试菌株密集划线接种于无菌平板上，用镊子夹取风干的滤纸片放在接种的平板上。放入培养箱。37℃倒置培养 24h，观察结果。
2.4.2 微量肉汤稀释法
无菌操作，将制备的浓度相当于 0.5 麦氏比浊标准的菌悬液，经肉汤 1∶1000 稀释后分别加到无菌 96 孔聚苯乙烯板中的第 1-11 孔，每孔中加 180μl。将不同浓度梯度的粗提物溶液分别加到上述 1-10 孔中，每孔 20μl，第11 孔不加粗提物作为生长对照。使第 1-11 孔最终粗 提 物 浓 度 分 别 为 128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0mg/ml，将 96 孔板密封后置 35℃普通空气孵育箱中，孵育 24h，用酶标仪在 630nm 处检查吸光度值，记录实验数据。
3 讨论
本实验通过滤纸片法对未知菌株发酵液中有效成分进行抑菌效果测定，结果发现该菌株发酵液中的有效成分对多种菌种均有较强的抑制作用，抗菌谱较广，对表皮葡萄球菌、伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌、痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌抑菌效果较好，其中伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌和痢疾杆菌吸光度上升幅度趋于一致，说明该物质对这三种菌的作用效果相同；表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌虽在8mg/mL 时所测的吸光度值开始上升且幅度大致相同，但当粗提物浓度降到 4mg/mL 时，吸光度走向偏差增大，可能原因为金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性菌而表皮葡萄球菌是革兰氏阴性菌，革兰氏阳性菌耐受更强。对枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的抑菌效果为 16mg/mL，但枯草吸光度上升的幅度比大肠杆菌大，说明枯草芽孢杆菌对抑菌成分的耐受高于大肠杆菌，猜测这可能与它细胞壁的结构及芽孢有关。但同为革兰氏阳性菌的金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌，检测的吸光度值差距明显，我们猜测芽孢很可能起到了至关重要的作用。
综上所述，未知菌株分泌的活性物质有较强的广谱抑菌作用，且乙酸乙酯能有效萃取活性物质。但该菌的真实面目需进一步确实。
